ПЦР на гепатит B

Наличие современных препаратов против гепатита B (HBV) с четкими показаниями для их назначения требует точной и быстрой верификации диагноза. Однако ввиду скудных клинических данных на первых неделях болезни и ограниченности иммуноферментных методов анализа, скорость постановки диагноза снижается.

Присутствие маркеров анти-HBc IgM, HBsAg, анти-HBc, HBeAg, анти-HBe позволяют подтвердить HBV или установить факт перенесенной болезни. Но определить присутствие активных вирусных частиц в крови и посчитать их число на момент проведения исследования можно посредством ПЦР — количественного real-time теста по выявлению гепатита B. Метод, в сравнении с иммуноферментными способами диагностики, решает диагностические проблемы и позволяет прогнозировать течение болезни на фоне приема противовирусных препаратов.

Основы диагностики заболевания

Диагностика гепатита B основывается на оценке клинических проявлений, иммуноферментных и инструментальных методов исследований. Заболевание протекает в острой фазе после инкубационного периода и, в зависимости от дозы инфекции и эффективности лечения, переходит в хроническую стадию. Главной целью лечения остается предотвращение хронизации, то есть элиминация всех вирусных частиц из крови. Клиническая норма течения болезни — излечение без последующей виремии.

Факт устранения инфекции необходимо доказать количественным методом исследования.

Поскольку любой качественный иммуноферментный анализ позволяет диагностировать HBV косвенно, то есть не показывают наличие возбудителя во внутренней среде организма, а характеризует иммунный ответ на инфекцию, то контроль эффективности терапии и факт излечения становится труднодоказуемыми. Потому пациенту с гепатитом B или с наличием диагностических критериев в его пользу должна проводиться полимеразная цепная реакция с целью количественного определения числа вирусных частиц в крови. Диагностическая норма — это отсутствие копий ДНК инфекта.

Описание диагностического метода

Высокочувствительный метод ПЦР-диагностики гепатита В относится к категории генно-инженерных молекулярно-биологических исследований. Посредством него определяется количество вирусной ДНК в биологическом материале пациента и допустимая норма. По полученным результатам устанавливается число вирусных частиц в единице объема. Материалом для диагностического теста является венозная кровь пациента. Забор желателен натощак из-за возможного влияния хилезной сыворотки на результат исследования.

Полученные результаты необходимо предоставить врачу для интерпретации и определения дальнейшей тактики. Самостоятельная расшифровка не представляет диагностической ценности.

Значимость результата числа вирусных частиц, полученного метода ПЦР, превышает значение иммуноферментных исследований. Поскольку анализ в режиме real-time показывает присутствие возбудителя заболевания в крови, его информативность выше прочих. Если ИФА свидетельствуют только о наличии антител, что наблюдается с 4-х недель инкубационного периода и сохраняется более 8 недель после элиминации вируса из крови, то полимеразная цепная реакция однозначно подтверждает активное течение заболевания или его излечение, характеризует динамику назначенной терапии.

Полимеразная цепная реакция с количественным определением частиц возбудителя решает диагностические вопросы в пользу прекращения лечения в связи с выздоровлением или продолжения терапии из-за ее недостаточной эффективности. Метод максимально специфичен в отношении вируса HBV и отличается приемлемой погрешностью.

Показания и цели выполнения

Количественный анализ гепатита B является наиболее достоверным и позволяет подтвердить данные, полученные иммуноферментными методами. Он назначается при:

  1. получении положительного диагностического результата ИФА;
  2. лечении пациента с установленным диагнозом вирусного поражения печени;
  3. при диагностике гепатитов смешанной этиологии;
  4. при необходимости определения вирусной нагрузки у пациента.

Поскольку более широко в практике инфекциониста применяется метод иммуноферментного анализа, то часть пациентов с легким течением болезни можно лечить и не прибегая к необходимости подсчета вирусной нагрузки. Но ПЦР общепринято считается «золотым стандартом» диагностики в гепатологии, так как из-за однозначности своего результата снимает ряд организационных вопросов. Поэтому направление пациента на количественный анализ преследует следующие цели:

  • получение данных о числе вирусных частиц в крови пациента;
  • подтверждение острого течения гепатита и своевременной верификации хронизации заболевания;
  • постоянное выявление латентных вирусоносителей с положительными ИФА-тестами, мониторинг их виремии;
  • принятие решения о назначении антивирусного лечения, его комбинирования и прекращения.

Наиболее значимой целью применения количественного ПЦР-теста на выявление HBV является определение возможных комбинаций лечения. В случаях с высокой вирусной нагрузкой результат анализа дает специалисту возможность приступить к комбинированию препаратов. В ходе терапии на основании результата ПЦР легко определить эффективность назначенного фармакологического лечения. Руководствуясь только данными иммуноферментных методов, нельзя своевременно определить факт излечения и его текущую эффективность. Поэтому количественный real-time тест — необходимый анализ перед началом лечения острого гепатита, латентного вирусоносительства с высокой виремией и хронического HBV.

Интерпретация результатов количественного ПЦР-теста

Расшифровка результатов количественного ПЦР-теста должна проводиться лечащим врачом пациента. Необходимо дать оценку диагностического показателя и определить терапевтическую тактику.

Стандартный анализатор способен выдавать количественный показатель, который отражает число копий вирусной ДНК, присутствующих в исследуемой венозной крови. Единицы измерения — копии/мл, МЕ/мл (копии на миллилитр, международные единицы на миллилитр). Расшифровка результатов приведена в таблице с указанием разных единиц измерения.

Копии/млМЕ/млХарактеристикаТактика лечения
<750<360Концентрация вируса ниже диапазонного показателя, нормаОпределение тактики по клиническим данным, результатам биохимического, иммуноферментного, инструментального обследования.
<105<2*104Умеренная виремияТактика определяется результатами биопсии печени, биохимического анализа.
>105>2*104Высокая виремияПоказана противовирусная терапия, умеренный риск хронизации.
>1*108>4,8*107Показатель выше диапазона значений анализатораПроведение комбинированной противовирусной терапии с мониторингом виремии. Высокий риск хронизации HBV.

Анализатор способен выдавать один качественный показатель «не обнаружено». Он означает, что ДНК вируса в исследуемом материалы не были определены, либо их число находится ниже чувствительности аппарата (диагностическая норма).

Анализатор распределяет значения в линейном диапазоне концентраций. У современных аппаратах он определен детектирующим амплификатором и находится в пределе от 750 до 1*108 копий на миллилитр. В международных единицах на миллилитр — от 360 до 4.8*107.

Спорные моменты интерпретации результатов

Расшифровка показателей, которые определяет количественный ПЦР-анализатор, позволяет сделать единственно возможное заключение о состоянии пациента. Однако существует значение, вызывающее неоднозначные трактовки. Результат «не обнаружено» может свидетельствовать как о полном отсутствии вирусных частиц гепатипа В, так и о их низком числе, то есть ниже линейного диапазона, улавливаемого детектирующим амплификатором. Поскольку анализ проводится после положительного иммуноферментного теста, то вероятность контакта с вирусом велика. Это либо условная норма (поствакцинальная реакция), либо малая виремия после заражения. Тактика наблюдения, как и при умеренной виремии, должна включать анализ аминотрансфераз и ультрасонографию печени с повторным проведением ИФА.

В прочих клинических ситуациях расшифровать количественный тест ПЦР — значит решить диагностические сложности, возникшие из-за недостатков ИФА-исследований. Это — окончательный метод, позволяющий решить, присутствует ли вирус в крови пациента, способен ли он вызвать развитие хронического гепатита, или это норма клинического течения. При этом возможность выявления ДНК HBV в инкубационном периоде до момента синтеза антител гарантирует раннее выявление. Это важное диагностическое преимущество, которое в значительной степени влияет на прогноз при неосторожном очевидном заражении. Подобное может наблюдаться при заражении оперирующего хирурга или пациента при переливании крови.

  • Дина

    Здравствуйте, можно узнать расшифровку анализа пцр что это значить? 2.2*10^3