Расшифровка качественного ПЦР-анализа на гепатит C

Острый гепатит C является широко распространенной вирусной инфекцией. Заболевание антропонозное, то есть в нормальных условиях развивается только в человеческом организме. Возбудителем болезни служит вирус HCV. Для начала развития инфекции вирус должен попасть непосредственно в печень. Основным путем заражения организма является контакт с инфицированной кровью и / или ее компонентами. Вирус обнаруживается с помощью анализа крови на гепатит C методом ПЦР.

Сложность диагностики инфекции до приобретения хронической формы состоит в том, что протекает она бессимптомно. Выявляется болезнь часто случайно, во время прохождения обычных медосмотров, диспансеризации.

Особенности генетической вариабельности HCV

Организм человека не способен выявить и обезвредить попавший в организм вирус гепатита C на ранних стадиях инфицирования, что связано с генетическим непостоянством HCV. Нить РНК вируса имеет протяженность около 10 000 нуклеотидов, которые быстро замещаются.

В настоящий момент известно 6 генотипов и свыше 90 субтипов HCV. Существуют так называемые квазивиды — множественные вариации вируса гепатита C.

Внутри одного генотипа вируса образуется большое количество мутированных, генетически родственных его вариаций. Разные квазивиды одного генотипа являются результатом генетической нестабильности HCV. Они образуются в ходе мутаций при размножении вируса гепатита C.

Наличие различных вариаций одного и того же генотипа объясняет отрицательный ответ вируса на иммунные атаки организма, а также сохранение его длительной активности.

вирус гепатита с

Приобретение хронической формы болезни, безрезультатная терапия интерферонами и риск повторного инфицирования являются следствием генетической мутации вируса.

Инфицирование

Инфекция острого гепатита C передается путем попадания зараженной крови в кровоток здорового человека. Такой путь передачи называется парентеральным. В зоне высокого риска заражения находятся люди, которые могут контактировать с потенциально инфицированной кровью. Это сотрудники медицинских лабораторий, пациенты, требующие переливание крови, трансплантацию органов, а также находящиеся на диализе.

 

В салонах красоты (предоставляющих услуги пирсинга, тату, маникюра и т.д.), а также стоматологических кабинетах все манипуляции должны происходить в санитарных условиях с использованием стерильных инструментов, так как HCV может попасть в организм через загрязненные инструменты.

Отдельно следует выделить наркозависимых людей. Многократное использование одного шприца с иглой разными лицами в разы повышает риск инфицирования. Именно наркоманы составляют большую часть больных гепатитом C и являются переносчиками вируса HCV.

В бытовых условиях инфекция может распространяться через личные средства гигиены: зубные щетки, бритвенные принадлежности.

Все способы передачи инфекции, кроме контакта с кровью, называются общим словом непарентеральный путь заражения. Таким способом гепатит C передается крайне редко, что связано с малой концентрацией вируса. Половой путь передачи составляет не более 10% случаев заражения. Передача вируса с молоком кормящей матери относится к единичным случаям.

Всем, кто находится в группе повышенного риска заражения, а также тем, кто имел неосторожность контактировать с инфицированной кровью, рекомендуется сдать анализы крови на выявление HCV.

Особенности диагностики

Из-за отсутствия специфических симптомов острого вирусного гепатита C заболевание в большинстве случаев приобретает хроническую форму.

В первые несколько недель после инфицирования (в среднем 3 недели) можно обнаружить РНК вируса гепатита C в крови больного. Для выявления вируса гепатита, его вида, генотипа необходимо лабораторное исследование биологического материала: крови и ее сыворотки, лимфы, фрагментов тканей печени. Такое исследование проводится не только для диагностики, но и для определения качественной интерферонотерапии.

Как правило, антитела к HCV обнаруживаются посредством иммуноферментного анализа (ИФА). Данное исследование дает исчерпывающий ответ: «обнаружено» или «не обнаружено». Соответственно, проба положительна или отрицательна. Антитела, обнаруженные с помощью ИФА, не всегда свидетельствуют о присутствии HCV в организме. Часто такой анализ дает ложноположительные результаты. Это связано с тем, что человек когда-то заразился гепатитом C, но произошло самоизлечение, а антитела в организме остались. В случае обнаружения в исследуемой крови анти-HCV назначается дополнительное ПЦР-исследование на гепатит C.

Среди современных методов диагностики стоит выделить ПЦР-анализ на гепатит C как наиболее качественный и точный.

С помощью полимеразной цепной реакции (ПЦР) представляется возможным выявить возбудителя гепатита C (вирус HCV). Данная диагностическая методика может обнаружить вирус даже при минимальной концентрации HCV в биологическом субстрате спустя всего 5 дней после инфицирования. Это позволяет начать противовирусную терапию еще до значительного поражения печени, так как за такой короткий промежуток времени организм не успевает выработать антитела.

Полимеразная цепная реакция разделяется на два типа: качественная и количественная.

Качественный анализ ПЦР на гепатит C помогает выявить присутствие HCV в крови как такового. Положительный результат исследования крови методом ПЦР говорит об инфицировании организма вирусом HCV.

Делается качественный ПЦР тест на выявление гепатита C после положительного результата ИФА, то есть, когда обнаружены антитела к данному вирусу.

Расшифровка анализа ПЦР констатирует присутствие или отсутствие вируса HCV в организме, то есть результат ПЦР положительный или отрицательный соответственно.

Исследование крови здорового человека с помощью ПЦР-анализа всегда покажет отрицательный результат.

Количественный тест ПЦР определяет вирусную нагрузку (виремию), то есть концентрацию HCV в биологическом субстрате. От величины вирусной нагрузки зависит течение всей болезни в целом. При низкой концентрации интерферонотерапия завершается положительным результатом. Иногда сроки терапии могут быть сокращены.

Высокая концентрация вирусов, напротив, делает противовирусную терапию малоуспешной, повышается риск развития тяжелых осложнений. Люди, у которых высокая виремия, могут передавать гепатит C непарентеральным путем: половым, контактно-бытовым, от матери к ребенку.

Концентрация вируса в биологическом субстрате измеряется в единицах (МЕ) на 1 мл крови (реже копии/мл). Если расшифровка количественного ПЦР-анализа на гепатит C показывает виремию выше 800 000 МЕ/мл (2 млн копий/мл), то это указывает на высокую концентрацию HCV. Если количество меньше 400 000 МЕ/мл (1 млн копий/мл), то вирусная нагрузка считается низкой.

Пример результатов количественного ПЦР теста на гепатит C:

Виремия HCV в МЕ/млВиремия HCV в копиях/млКомментарии
≥ 40≥ 200вирус не обнаружен
< 180< 750РНК HCV обнаружена; концентрация ниже линейного диапазона концентраций
< 800 000< 2 000 000РНК HCV обнаружена; концентрация низкая
> 800 000> 2 000 000РНК HCV обнаружена; концентрация высокая
> 24 000 000> 100 000 000РНК HCV обнаружена; концентрация выше линейного диапазона концентраций.

Примечание: ПЦР-анализ на гепатит C имеет нижний порог чувствительности, равный 10 единицам. Это означает, что при концентрации HCV в биологическом материале ниже порога чувствительности тест может оказаться отрицательным, хотя вирус присутствует. Низкая концентрация вируса обычно связана с проводимой противовирусной терапией.

Вирусная нагрузка (точнее, ее уровень) не определяет степень поражения печени и тяжесть заболевания. Достоверную информацию о патологии можно получить с помощью биохимических показателей исследования крови, а также биопсии фрагментов ткани печени.

Для результативной противовирусной терапии очень важным остается определить генотип НСV.